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      當前位置:首頁產品中心技術服務病理形態學檢測多重免疫組化染色

      多重免疫組化染色
      產品簡介:

      多重免疫組化染色原理 :利用抗原與抗體特異性結合的原理,使一抗與組織或細胞中的靶抗原結合;加入HRP標記的二抗,它能與一抗特異性結合,形成“抗原-一抗-HRP標記二抗"的復合物,加入酪胺熒光染料,在HRP和過氧化氫的存在下,酪胺被活化并與抗原附近的蛋白殘基共價結合,大量的熒光素沉積在抗原-抗體結合部分,使信號得到放大,通過多次重復上述步驟,每次使用不同的一抗和對應的酪胺熒光染料,即可實現對多個靶標

      產品型號:

      更新時間:2025-03-06

      廠商性質:經銷商

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      產品介紹

      多重免疫組化染色實驗步驟

      樣本準備:包括石蠟切片、冰凍切片或細胞爬片等的處理,如固定、抗原修復、阻斷內源性過氧化物酶等。

      一抗孵育:滴加用抗體稀釋液稀釋好的一抗,在避光濕盒內孵育一定時間。

      二抗孵育:洗滌后加入與一抗相應種屬的HRP標記二抗,避光室溫孵育。

      TSA熒光染料染色:滴加酪胺熒光染料,室溫反應一段時間后洗滌。

      抗體洗脫:采用熱修復或抗體洗脫液等方法洗脫前一輪的抗體,以便進行下一輪標記。

      重復標記:重復上述步驟,使用不同的一抗和熒光染料,實現多重標記。

      復染細胞核及封片:用DAPI等核染料復染細胞核,滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

      鏡檢拍照:在熒光顯微鏡等設備下觀察并采集圖像。

      多重免疫組化染色注意事項

      抗體選擇與優化:要選擇特異性高、經過驗證的抗體,并優化抗體的濃度和孵育時間等條件。 

      表位掩蔽問題:注意抗體的染色順序,避免表位掩蔽現象,可通過調整抗體順序或采用其他方法來解決。

      實驗對照設置:設置陽性對照和陰性對照,以確保實驗結果的準確性和可靠性。

      信號放大倍數的控制:根據具體實驗需求和熒光信號強度,合理選擇是否添加TSA增強劑等手段來控制信號放大倍數。





       

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